一、前言 佐剂是疫苗的一种添加剂,当它先于抗原或与抗原混合注入机体后,能够增强机体对抗原的免疫应答或者改变免疫反应的类型,属于非特异性的免疫增强剂。随着现代生物技术和基因工程技术的迅速发展,针对不同疾病已开展了各种新型基因工程疫苗的研制,佐剂尤其是新型免疫佐剂的研究就显得尤为迫切。 在标准 T/CVDA02《复合矿物油动物疫苗佐剂》中,对于佐剂的质量检测中有明确规定测定羟值含量,本方法参考其中的检测方法制定了运用电位滴定检测的方法。该方法检测方便,减少了人为判断指示剂颜色对结果的误差影响,增加了检测精确度,并且提高了检测效率,解放操作员的双手。 二、仪器与试剂 2.1、仪器 JH-T6 全自动电位滴定仪,PH 复合电极,水浴锅,分析天平等。 2.2、试剂 酰化试剂(取对甲苯磺酸 14.4g, 置干燥的 500ml 具塞锥形瓶中,加醋酸乙酯 360ml,振摇使溶解,缓缓加入醋酐 120ml 摇匀,密塞,放置 3 日后备用),吡啶-水(3:5),氢氧化钾标准滴定液(1mol/L)。 三、实验方法 3.1、样品检测 准确称取 2g 左右样品,置于滴定杯中,加入 5mL 酰化试剂,封口膜密封,轻轻摇动至溶解。置于 50℃水浴加热 25min ,放冷,加吡啶-水(3:5)20mL ,5 分钟后用氢氧化钾标准滴定液(1mol/L),以 PH 复合电极为工作电极,在JH-T6上进行滴定至终点。同时做空白实验。 设定滴定仪参数如表 1 所示: 表 1 滴定参数设置 滴定模式: | 动态滴定 | 最小添加体积 | 0.02mL | 电极平衡时间: | 4s | 预搅拌时间: | 60s |
电极平衡电位: | 1mv | 滴定速度: | 标准 | 结束体积: | 10mL | 相关系数: | 12.69 | 电位突跃量: | 200 | 补液速度: | 5 | 搅拌速度: | 7 | 滴定前平衡电位: | 10mv |
3.2、图谱测试示例 
四、结果与讨论 4.1、实验结果 实验结果如表 2 所示: 表 2 测试结果 样品批号 | 样品序号 | 样品质量/g | 滴定液浓度(氢氧化钾) /(mol/L) | 滴定体积/mL | 羟值(mg/g) | 平均值 | 20211201 | 空白 | / | 1.01838 | 26.225 | / | / | 1 | 2.01652 | 25.475 | 21.249 | 23.301 | 2 | 2.01019 | 25.386 | 23.802 | 3 | 2.01160 | 25.350 | 24.851 | 20220101 | 1 | 2.02788 | 25.365 | 24.229 | 24.335 | 2 | 2.09250 | 25.326 | 24.545 | 3 | 2.03595 | 25.361 | 24.231 |
4.2、结论 本次测定的动物疫苗佐剂的羟值均小于参考标准要求中的 25(mg/g),测试结果重复性良好,满足检测要求。 参考文献 [1] T/CVDA02 复合矿物油动物疫苗佐剂[ S ].
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